N-terminus of desmin controls its retrograde transportation in differentiating myoblast cells

Abstract

目的:在分化的肌母細胞或肌管中,研究結蛋白的運輸機制。方法:利用熒光漂白恢復的方法,在野生型肌管細胞中直接觀察綠色熒光蛋白標記的結蛋白desmin-EGFP的運動;通過過表達dynamitin,抑制胞漿動力蛋白cytoplasmic dynein介導的沿微管向負極的運輸,觀察結蛋白在微管驅動蛋白Kinesin-1重鏈Kif5b敲除細胞中定位的改變;構建Flag tag標記的不同結構域缺失的結蛋白表達載體,轉染野生型及Kif5b敲除細胞,通過免疫熒光染色檢測不同結構域缺失對結蛋白定位的影響。結果:在野生型肌管細胞內,desmin-EGFP沿正向和負向同時進入被漂白的區域。在Kif5b敲除細胞內,結蛋白聚集于細胞中心;抑制動力蛋白的活性使得結蛋白在該細胞中的聚集程度減輕。結蛋白N端蛋白結構域缺失對其在野生型細胞中的定位沒有影響,但使其在Kif5b敲除細胞中心的聚集明顯減弱。結論:結蛋白在分化的肌母細胞或肌管中的定位是正向運輸和負向運輸雙重作用的結果,其中負向運輸可能由動力蛋白負責,并依賴于結蛋白N端蛋白結構域的表達。